如果色谱柱长期不用，需要做什么保护吗？

需要。色谱柱长期不用时，关键是做好冲洗、置换保存液、密封、记录和定期检查，避免盐析、微生物生长、固定相水解、柱床干裂或污染物沉积。

1. 长期不用前最重要：先把缓冲盐洗干净

如果流动相中含有：

磷酸盐；

醋酸盐；

甲酸铵/乙酸铵；

离子对试剂；

无机盐；

酸碱添加剂；

不要直接停机保存。

应先用与流动相兼容的水相充分冲洗，例如：

纯水；

低比例有机相水溶液；

厂家推荐冲洗液。

目的：

防止盐析结晶；

防止筛板堵塞；

防止柱头污染；

防止泵、管路和柱内残留盐腐蚀或沉积。

一般可冲洗 10–20 个柱体积，或至少冲到基线和压力稳定。

2. 反相柱 C18/C8 的保存方法

常见反相柱包括：

C18；

C8；

C4；

Phenyl；

CN 反相模式；

PFP；

AQ 水相兼容柱。

推荐保存液

通常可用：

70%–90% 甲醇/水

70%–90% 乙腈/水

或厂家说明书推荐溶剂。

很多普通 C18 柱长期保存可用 80% 甲醇水溶液 或 80% 乙腈水溶液。

不建议长期保存于

纯水；

纯缓冲盐；

含盐流动相；

强酸或强碱流动相；

高比例水相，普通 C18 可能发生疏水塌陷；

易挥发后导致柱床干涸的溶剂且未密封。

3. 正相柱的保存方法

正相柱如：

硅胶柱；

正相氨基柱；

正相氰基柱；

二醇基柱。

保存前要避免直接从水相切到正己烷等强非极性溶剂，必须逐步过渡。

常见保存液

正己烷；

异丙醇/正己烷；

正相流动相；

厂家推荐保存液。

注意

正相柱怕水分影响活性，长期保存应密封，避免空气中水分进入。

4. HILIC 柱的保存方法

HILIC 柱常用于极性化合物，固定相包括：

酰胺；

两性离子；

氨基；

二醇基；

裸硅胶。

常见保存液

一般使用：

80%–95% 乙腈/水

或 HILIC 初始流动相，但不要含盐长期保存。

如果使用过缓冲盐，应先用高比例水或适当比例水/乙腈去盐，再置换到高比例乙腈保存液。

5. 离子交换柱/离子色谱柱保存方法

离子交换柱差异很大，不建议一概而论。

常见保存原则：

先去除样品和强吸附杂质；

按厂家方法再生到指定离子型；

使用厂家推荐保存液；

避免柱床干涸；

防止微生物生长。

有些水相离子交换柱长期保存可能需要：

低浓度盐溶液；

含防腐剂的水溶液；

特定 pH 缓冲液；

厂家专用保存液。

但注意：不要随意用高比例有机相保存离子交换树脂柱，可能导致树脂收缩、性能变化。

6. SEC/GPC 柱保存方法

尺寸排阻柱特别需要小心，因为填料孔结构和柱床稳定性很重要。

水相 SEC/GFC 柱

用于蛋白、多糖、生物大分子时，通常保存于：

厂家推荐缓冲液；

含低浓度盐和防腐剂的水相；

有时含 0.02% 叠氮钠作为防腐剂，但要注意实验室安全和仪器兼容性。

不建议：

纯水长期保存，容易长菌；

高比例有机相随意冲洗；

强酸强碱冲洗；

柱子干涸。

有机相 GPC 柱

用于聚合物分析时，保存液通常为：

THF；

DMF；

氯仿；

甲苯；

具体取决于柱子和方法。

必须严格按厂家说明，因为不同 GPC 填料对溶剂兼容性差异很大。

7. 手性柱保存方法

手性柱差异非常大，尤其是多糖衍生物手性柱。

保存前一定要看说明书。

有些手性柱可用：

正己烷/异丙醇；

乙醇；

甲醇；

乙腈；

特定反相保存液。

但有些涂覆型手性柱不能接触某些溶剂，例如 THF、氯仿、丙酮、乙酸乙酯等，否则可能溶解或破坏手性选择剂。

8. 生物柱、蛋白柱、亲和柱保存方法

例如：

Protein A 柱；

Protein G 柱；

IMAC 柱；

HIC 柱；

蛋白离子交换柱；

抗体分析柱。

通常要：

按厂家程序清洗；

去除蛋白残留；

用含防腐剂的保存液；

低温保存，常见为 2–8 ℃；

避免冷冻；

避免柱床干涸。

亲和柱尤其不能随便用强有机溶剂或极端 pH 保存，否则配基可能失活。

9. 保存时要不要把柱子放冰箱？

看柱类型。

可以考虑 2–8 ℃保存的

蛋白柱；

亲和柱；

部分水相 SEC 柱；

生物大分子分析柱；

厂家要求冷藏的柱。

常温保存即可的

常规 C18/C8 反相柱；

正相柱；

HILIC 柱；

多数小分子分析柱。

注意：

不要冷冻；

从冰箱取出后要恢复到室温再使用；

防止冷凝水进入柱盒或标签脱落；

有机溶剂含量高的柱子通常无需冷藏。

10. 保存时的物理保护

长期不用时应做到：

用合适保存液充分置换；

拧紧柱两端堵头；

防止柱内溶剂挥发；

保持柱子水平或放回原包装；

避免高温、阳光直射；

避免震动和跌落；

不要让柱子干涸；

标签标清楚保存液、日期和最后使用条件。

建议记录：

柱型号和序列号；

最后流动相；

清洗步骤；

保存液；

保存日期；

柱压、柱效或最后一次系统适用性结果。

11. 再次使用前需要做什么？

长期保存后重新启用，不要直接进样。

建议：

检查柱两端是否漏液、干涸、结晶；

用低流速接入系统；

先用保存液或兼容溶剂冲洗；

逐步切换到流动相；

如果流动相含盐，先保证有足够水相过渡；

平衡至少 10–20 个柱体积；

观察柱压是否异常；

做空白进样；

做标准品或柱效测试。

12. 简单总结

长期不用色谱柱时，最重要的是：

含盐流动相一定要洗掉；

换成厂家推荐保存液；

两端密封，不能干；

避免高温、冷冻和强光；

特殊柱一定按说明书保存；

重新使用前低流速充分平衡。

对于普通 C18 反相柱，常用做法是：

先用水洗掉盐，再用 80% 甲醇或 80% 乙腈充分置换，拧紧堵头，常温避光保存。