如何绘制和判断校准曲线是否合格

一、如何绘制校准曲线

1. 配制标准溶液

按照分析物的浓度范围需求，配制一系列不同浓度的标准溶液，通常5–7个浓度点为宜。

浓度分布应覆盖样品中可能出现的低、中、高值。

2. 进样测定

各标准溶液分别按照正常分析流程进样，记录峰面积（或峰高）；最好每点重复进样2–3次。

3. 作图 & 拟合方程

横坐标（X轴）：标准溶液的浓度，单位如mg/L、μg/ml等。

纵坐标（Y轴）：对应的峰面积或峰高（仪器响应值）。

使用Excel、Origin等软件绘制散点图，并用线性回归（常用y=bx+a）或其它适合的函数进行拟合，得到回归方程和相关系数（R²）。

二、如何判断校准曲线是否合格

1. 线性相关系数（R²或r）

最常用的评价指标。R²（决定系数）越接近1，线性越好。

通常要求 R² ≥ 0.99，有些法规要求更高或可略放宽（如≥0.995、≥0.998等）；低于0.99需查明原因。

2. 残差分析

检查各点实际响应与回归预测值之差（残差）。

残差呈随机分布且绝对值较小为佳。如果某点残差特别大，说明该点异常或有操作失误。

3. 灵敏度和线性范围

响应（如峰面积）与浓度的比值应在所有浓度区间基本一致（即斜率基本稳定）。

线性区间外，响应不随浓度等比例增加，不能盲目纳入。

4. 空白响应Vs. 检测下限

校准曲线低浓度端应高于空白响应及方法检出限，避免虚假“线性”。

5. 重复性

同一浓度多次进样，RSD应一般低于2%~5%，表示方法本身变异小。

6. 强制通过零点？

如果仪器确实存在本底响应，不宜强制通过零点；多数化学分析以“y = bx + a”形式（有截距）。

部分要求（如药典），低浓度本底接近零可通过零点拟合。

7. 法规与规范要求

仔细查阅方法标准、药典、食品安全法规等（如中国药典、USP、EPA方法等），遵循执业标准对R²、点数及其它指标的要求。

三、简单判断流程图

R² 是否合格？

是—> 下一步

否—> 调整方法或重做标准

拟合点是否均匀分布，残差无明显异常？

是—> 下一步

否—> 查找出错浓度点

重复性好？（RSD合格）

是—> 下一步

否—> 检查仪器或操作过程

线性区域范围是否包含样品浓度？

是—> 合格

否—> 增加浓度点或缩小分析范围