液相色谱保留时间漂移的原因

液相色谱（HPLC）分析中**保留时间漂移**属于常见问题。所谓“保留时间漂移”，是指在实验重复进样条件下，色谱峰的出峰时间发生了明显变化（比预期早或晚，甚至波动不定），这不仅影响定量准确性，还可能影响定性结果。以下为造成保留时间漂移的主要原因总结：

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## 液相色谱保留时间漂移的原因

### 1. 流动相成分波动

- **流动相配比变化**：各溶剂比例（如甲醇/水或乙腈/水等）配制不准确、溶剂随时间挥发或混合不完全，易致极性改变，直接影响保留时间。

- **缓冲液pH变化**：流动相中的缓冲液pH不同，极易影响酸碱性化合物的保留行为。pH有微小变化时，对弱酸/胺药物保留时间影响尤为显著。

- **流动相老化**：流动相长期存放可能发生成分分解、水分挥发、吸收CO₂等导致配方失衡。

### 2. 流速不稳定

- **泵流速波动**：泵的机械故障、进样器密封不良、活塞磨损或空气进入泵体，都会导致流速不稳，进而引起保留时间提前或延后。

- **管路堵塞**：管路或过滤头部分阻塞，某些流速下降，但仪器未检测出来。

### 3. 柱温波动

- 色谱柱未放在柱温箱中，或柱温箱控温精度不高/环境受影响时，温度升高会使分析峰保留时间缩短，温度降低则使保留时间延长。

- 柱温变化1–2℃，对大多数化合物保留时间都是可检测变化。

### 4. 柱效及色谱柱本身因素

- **色谱柱老化/污染/损坏**：柱效下降，填料活性下降，导致保留时间变短或漂移，某些活性点被污染或溶出也会光学活性或极性改变。

- **使用新/旧柱未重新平衡**：新换柱子或长时间停用后再用，柱子的活性、溶剂含水量都需重新平衡。

### 5. 进样问题

- **进样量太大或进样溶剂类型与流动相不符**：溶剂效应影响致峰型异常甚至保留时间偏移。

- **样品溶液中污染物或缓冲盐与流动相/柱不兼容**。

### 6. 泵或自动进样器维护不良

- **密封圈老化**：密封不良，小量空气混入，造成流动相输送异常。

- **进样阀堵塞或泄漏**。

### 7. 系统死体积与管路问题

- 色谱系统存在死体积或管路弯曲、松动、连接不良，易引入滞后或缓冲作用，表现为峰位置漂移。

### 8. 检测器设置问题

- 检测器流通池或参数（如采集启动延时）设置不当，造成记录的不一致。

### 9. 仪器及外部环境变化

- 外界供电波动、实验室空调/气温变化，影响仪器及溶剂温度。

### 10. 梯度洗脱问题

- 梯度系统管路切换、延迟体积设置不准、溶剂比例切换不及时，均可导致保留时间与理论不符。

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## 检查与解决建议

1. 避免人为配液误差，使用精确的移液和天平。

2. 保证流动相新鲜，pH准确，及时更换老化流动相。

3. 色谱柱使用前后充分平衡（建议平衡30min以上）。

4. 每次实验充分开启柱温箱，维持稳定温度。

5. 定期维护泵、进样器和管路，杜绝漏液和空气混入。

6. 使用与流动相极性一致或更弱的溶剂溶解样品。

7. 梯度洗脱注意编程和比例切换同步，泵需定期校准。

8. 实验记录时注明环境温度和设备设定，便于追溯。

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## 实验中遇到保留时间漂移，可按上述各条逐一排查，往往能迅速定位原因并解决问题。