色谱负峰原因总结及解析

色谱负峰原因总结及解析

在液相色谱（HPLC）等分析中，“负峰”是指色谱图上基线向下产生的尖锐或宽阔波谷，类似倒置的正峰。出现负峰时，实际表示检测器信号相对于基线减少，而非增加，这属于色谱异常现象之一。常见原因与解析如下：

1. 检测器流动相错配

发生原理：

检测器流通池中充满的参考流动相，与进样后的样品溶剂或流动相成分不同（如溶剂极性、吸光度）。

比如，采用梯度洗脱时，进样溶液为强紫外吸收的纯甲醇，而流动相主溶剂是甲醇和水的混合物，进样后检测器接收到的吸光度比基线值小，出现负峰。

典型场景：

固定波长UV检测时，进样溶剂比流动相更强吸光：负峰；

进样溶剂比流动相弱吸光：正峰（基线升高）。

2. 灰尘、气泡或污染物的影响

某些污染物注入，改变了检测池内折光率、流动状态，使基线突降后恢复，表现为负峰。

气泡穿过检测池，短时阻挡了光路，也可见负波动。

3. 衍生反应导致产物信号降低

在线衍生检测法中，如果反应后产物的检测信号（如吸光度）比反应前的低，则目标物的出峰为负信号。

比如某些成分与衍生试剂结合后吸收降低，出现负峰。

4. 检测器极性误接

某些检测器如电化学检测，如果正负极方向接反，则本应正向的电流读取为负信号。

5. 抑制方法流动相背景变化

离子色谱中常见离子抑制法，如果溶液isocratic与样品的本底离子浓度变化使检测器响应降低，会生成负峰。

主要见于电导检测时。

6. 样品某组分对基线的吸附/化学反应

样品组分与流动相反应、柱效或填料上发生吸附，使流动相本底吸收下降，形成负峰。

7. 数据采集、背景校正异常

检测仪器初始时基线未校正，溶剂峰在校正区出现，信号被算法处理为负。

防范与排查建议

进样溶剂与流动相保持一致或相近，特别是UV检测。

流动相彻底脱气，避免气泡。

定期清洗流通池、进样针和进样通路。

采用合适的流动相比例缓冲，对接双色流动或梯度切换波长要慎重。

如梯度洗脱，注意样品溶剂适配梯度初始流动相。

检测器极性和零点及时校准。

小结

色谱负峰多因检测池内溶剂本底、进样溶剂和流动相吸光度不同、气泡、污染、极性反接、流动相本底波动等原因引起。

本质上，负峰是检测信号突然低于基线的表现，多为溶剂、参数或操作不当所致。