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三价铁离子等三价金属离子，在硅胶基质的色谱柱中极易死吸附，从而损坏色谱柱，在液相直接检测中存在较大难度。 本方法研究三价铁离子与EDTA形成紫外可见的强吸收络合物，再通过Comixsil HAX色谱柱保留。通过对络合物的定量从而定量三价铁离子等三价金属离子。 应用一：三价铁离子的检测 方法A、三价铁离子流动相中与EDTA络合
方法B、三价铁离子在样品配置过程中加EDTA进行络合，从而流动相中不再添加EDTA （本案例来源于某客户提供的保健品中亚铁离子的检测方案）
说明：在以上“方法A”中，络合三价铁离子的过程是在铁离子接触到流动相时瞬时进行的，从而络合物在HAX色谱柱上保留，并通过UV可视从而检测。在“方法B”中，案例的实际样品是硫酸亚铁，但是亚铁的二价离子，在固体盐溶解时，水中电离出的游离亚铁离子，即氧化成三价铁离子，实际检测到的也是三价铁离子的EDTA络合物，而这个与“方法A”不同的地方在于，客户不喜欢流动相中加EDTA，所以是在样品配置过程中，加入了EDTA，使样品在进样前已经络合完毕。“方法A"中是梯度条件，”方法B“中是等度条件。单纯的检测，都可以用等度的方法进行，更方便。 两种方法都可以用于单独检测三价铁离子或者二价铁离子。在此，需认识到，二价铁离子无法与三价铁离子分离的，因为二价铁离子实际就是氧化后的三价铁离子。所以，关于能否分离二价与三价铁离子的问题讨论，在这个方法中，是不存在的。 应用二：三价铋离子的检测 在前文三价铁离子的基础上。我们开发出三价金属离子HPLC-UV检测办法。实际应用中，遇到了三价铋离子的残留检测的问题。按照同样的思路，以下案例以EDTA与三价铋离子络合物状态，一样得以相似方法检测。
方法C、三价铋离子与流动相中的EDTA络合 （此案例来源于某客户提供的药物制剂中三价铋离子的检测方案）
总结： 综上，方法A,B,C的关于三价铁离子（二价铁离子）与三价铋离子，在药物制剂，保健品，药物残留中的应用。我们可以了解到，采用流动相中加EDTA,或者样品配置时加EDTA(可避免流动相中加EDTA)，使三价金属离子与EDTA络合合，基于Comixsil HAX智能混合柱对此络合物的保留，UV的可视化，可以用简单的HPLC+UV的方法来检测定三价离子（以上方法C中，客户实际上也自行开发了样品配置时加EDTA的方法）。同时，方法的实际优化过程中，EDTA的浓度与甲酸铵的浓度，会影响金属离子络合物的保留，峰形以及UV响应值。这些因素是需要根据不同实际样品而进行调整的。 小知识点：用过EDTA系统的清洗 在HPLC方法中，EDTA是能不使用则不使用的，然后它的特殊性，在一些传统的老品种，老药典方法中仍然存在。有很多关于用过EDTA的仪器，管路，如何清洗的问题。在此分享如下： 1.要使用EDTA时，管路尽可能用PEEK管； 2.怀疑或担心EDTA残留，要清洗仪器与金属管路时，可以用100%的50mM CuSO4水溶液先冲洗管路1小时，再用0.2%-0.3%的硫酸水溶液清洗30分钟，最后再用水清洗10分钟左右即可。
文中所采用的色谱柱规格为客户实际正好在使用的规格，而当我们想开展相关实验时，菲罗门推荐的首选用柱规格如下： 1.货号：FMD-HAX3-YONU，描述：Comixsil HAX 3u 100*3.0mm 2.货号：FMD-HAX3-EONU, 描述：Comixsil HAX 3u 100*4.6mm |
